艾美捷重组蛋白酶K是一种不含动物源性物质的(animal origin-free, AOF)的蛋白酶K，通过毕赤酵母(Pichia pastoris)发酵并纯化获得。

艾美捷重组蛋白酶K属于一种广谱的丝氨酸蛋白酶，可被某些丝氨酸蛋白酶的抑制剂如PMSF、AEBSF等所抑制。蛋白酶K无明显的切割特异性，能在脂肪族、芳香族或疏水性氨基酸的羧基侧裂解肽键，可被蛋白酶K水解的最小的肽是四肽。蛋白酶K对天然蛋白质的酶切降解非常有效，因此常用于在核酸分离过程中快速灭活内源RNA酶、DNA酶等核酸酶，并消化核酸结合蛋白等。本重组蛋白酶K的基因序列来源于林伯氏白色念球菌(Tritirachium album Limber)的蛋白酶K基因。

艾美捷重组蛋白酶K，无动物源/AF特异性：

除了肽键的裂解，它还能够催化肽酰胺水解。蛋白酶K被氟磷酸二异丙酯（DFP）或苯基甲烷磺酰氟（PMSF）灭活。螯合剂如柠檬酸盐和EDTA对酶活性没有影响。

应用：

蛋白酶K在分离高度天然、未受损的DNA或RNA中非常有用，因为大多数微生物或哺乳动物的DNA和RNA都被酶快速灭活，特别是在0.5-1%SDS存在下。

化验方法：

蛋白酶K水解用尿素变性的血红蛋白，并释放Folin阳性氨基酸和肽，这些氨基酸和肽被确定为酪氨酸当量。1个单位在37°C、pH 7.5下释放1μmol Folin阳性氨基酸，使用变性血红蛋白作为底物。

试剂

0.05 N HCl-稀释0.82 ml浓度。用试剂级水将HCl稀释至200ml。

0.5 M NaOH-将4.0 gm NaOH溶解在200 ml试剂级水中。

缓冲底物-将2.0克血红蛋白溶解在35毫升试剂级水中，加入36.0克尿素和16毫升0.5 M NaOH。室温下搅拌30-60分钟。加入0.618克硼-酸并搅拌。用5 N HCl将pH调至7.5，并将qs.调至100 ml。

酪氨酸标准（2.5 nmol/L）-将45.3 mg酪氨酸溶于100 ml 0.05 N HCl中。

0.3 M三氯乙酸-将9.8 gm三氯乙酸溶解在200 ml试剂级水中。

Folin试剂-将10 ml Folin Ciocalteus苯-酚试剂添加到20 ml试剂级水中。

相关文献：

Ebeling, W. , Hennrich, N. , Klockow, M. , Metz, H. , Orth, H. and Lang, F.

Proteinase K from Tritirachium album Limber , Eur J Biochem 47 , 91 , 1974

Fourcroy, P.

Isolation of Undegraded Polysomes from Radish Cotyledons: Use of Proteinase K and Cycloheximide , Phytochem 19 , 7 , 1980

Gajda, A. , Rudenskaya, G. and Stepanov, V.

Isolation and Comparative Properties of Serine Proteinases of the Microscopic Fungi Trichoderma lignorum and Trichoderma koningii , Biokhimiia 46 , 2064 , 1981