艾美捷小鼠肿瘤坏死因子α-ELISpot试剂盒使用指南
创始人
2024-02-13 11:48:38
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ELISpot Plus for enumeration of cells secreting TNF-α

This kit is ideal for users who want a convenient and sensitive assay. The assay is designed for the enumeration of cells secreting mouse TNF-α. The kit includes ELISpot plates pre-coated with monoclonal antibody, biotinylated detection antibody, Streptavidin-ALP and ready-to-use BCIP/NBT-plus substrate.

Pre-coated plates reduce assay time and minimize variability.

艾美捷小鼠肿瘤坏死因子α-ELISpot试剂盒基本参数:

中文名称:小鼠肿瘤坏死因子α-ELISpot试剂盒

英文名字:ELISpot Plus: Mouse TNF-alpha (ALP)

编号:3511-4APW-2

规格:2plates

应用程序:ELISpot

反应性:老鼠

BCIP/NBT加基质(25 ml)

检测抗体在含0.02%叠-氮化钠的无菌过滤(0.2μm)PBS中提供。Streptavidin ALP以0.1M Tris缓冲液和0.002%Kathon CG提供。小瓶已过满,以确保回收规定量。

存储:在环境温度下运输。到达时,所有试剂应在4-8°C下冷藏储存。板材应保持在室温下。

艾美捷小鼠肿瘤坏死因子α-ELISpot试剂盒使用指南:

A ELISpot板的制备(无菌条件)

1.从密封包装中取出平板,用无菌PBS(200μl/孔)洗涤4次。

2.用含有10%与细胞悬浮液相同血清的培养基(200μl/孔)调节平板。在室温下培养至少30分钟。

B在平板中培养细胞(无菌条件)

1.取出培养基,加入刺激物,然后加入细胞悬浮液。或者,细胞和刺激物可以在加入平板之前混合。

2.将平板置于37°C的含5%CO2的加湿培养箱中,培养12-48小时。在此期间不要移动板,并采取措施避免蒸发(例如,用铝箔包裹板)。

C斑点检测

1.通过清空平板去除细胞,并用PBS(200μl/孔)洗涤5次。

2.在含有0.5%胎牛血清(PBS-0.5%FCS)的PBS中将检测抗体(MT11B10生物素)稀释至0.5μg/ml。加入100μl/孔,在室温下孵育2小时。

3.如上所述清洗板(步骤C1)。

4.将Streptavidin ALP(1:1000)在PBS-0.5%FCS中稀释,并加入100μl/孔。在室温下孵育1小时。

5.如上所述清洗板(步骤C1)。

6.通过0.45μm过滤器过滤即用基质溶液(BCIP/NBT plus),并添加100μl/孔。直到出现明显的斑点。

7.通过在自来水中大量冲洗来阻止颜色发展。如果需要,移除暗渠(板下的软塑料)并冲洗膜的下侧。

8.让盘子保持干燥。在ELISpot读取器或解剖显微镜中检查和计数斑点。

9.在室温下将盘子存放在黑暗中。

 

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